Molecular prevalence of Anaplasma marginale in ruminants and Rhipicephalus ticks in northern Pakistan

@#Anaplasma marginale is the most prevalent tick-borne haemoparasite of cattle and causes huge economic losses to the dairy industry worldwide. This study aimed to determine the occurrence of A. marginale infection in blood and tick samples collected from livestock animals in the districts located in Khyber Pakhtunkhwa (KPK), Pakistan. A total of 184 blood and 370 tick samples were included in this study. It has never been reported that sheep, goats, and cattle in Tank, Ghulam Khan, Birmil and Miran Shah areas were infected with A. marginale. All samples of blood and ticks were collected through random sampling from March 2021 to January 2022 from cattle, sheep and goats and screened through PCR for anaplasmosis by using primer pairs of Anaplasma spp. Three hundred and seventy ticks were collected from infested hosts (120/184, 64.21%). Among the four morphologically identified tick species, the highest occurrence was recorded for Rhipicephalus sanguineus (n=138, 37.29%), followed by Rhipicephalus microplus (n=131, 35.4%), Rhipicephalus annulatus (n=40, 10.81%), Hyalomma anatolicum (n=31, 8.37%), and Hyalomma marginatum (n=30, 8.1%). The occurrence of female tick was highest (n=160, 43.24%), followed by nymphs (n=140, 37.38%) and males ticks (n=70, 18.9%). Among these ticks, A. marginale was detected in female ticks of R. microplus, and R. sanguineus. Molecular identification of A. marginale was confirmed in 120 out of 184 blood samples and 6 out of 74 tick samples. Overall, occurrence of A. marginale in blood and tick samples was found to be 65.21% and 8.1% respectively. Species-wise occurrence in blood samples of goats were 71.11% followed by sheep 68.31% and cattle 50%. Specie-wise occurrence of A. marginale in tick samples of cattle were 12.5% followed by goats 6.89%. The obtained sequence showed similarity with A. marginale reported from Kenya and USA. We report the first PCR based detection of A. marginale infection in blood samples and in R. sanguineus ticks of goats simultaneously.

Ehrlichiosis monocítica canina en la provincia de Entre Ríos, Argentina: confirmación molecular de casos en la ciudad de Concordia / Canine monocytic ehrlichiosis in Entre Ríos province, Argentina: molecular confirmation of cases in Concordia city

Resumen El objetivo del siguiente trabajo fue confirmar la presencia de Ehrlichia canis por diagnóstico molecular, a partir de muestras de perros con diagnósticos presuntivos, oriundos de la ciudad de Concordia, provincia de Entre Ríos. ADN fue extraído de 14 muestras de sangre de perros con diagnóstico presuntivo de EMC. Para la detección de ADN deE. canis se amplificó un fragmento del gen dsb, específico de este género, y su confirmación específica se realizó mediante secuenciación. Doce de las 14 muestras mostraron bandas del tamaño esperado. Las secuencias obtenidas mostraron un 98-100% de identidad con secuencias registradas en GenBank para E. canis. Además, se amplificó un fragmento del gen ARNr 16S mitocondrial de garrapatas obtenidas de un perro positivo. Las secuencias demostraron que corresponden a R. sanguineus sensu stricto (linaje templado). En este estudio se confirma la presencia de E. canis en la ciudad de Concordia, Entre Ríos, resultando en una alerta para los médicos veterinarios de la región, a fin de incentivar estrategias de prevención de la enfermedad y control del vector.

Abstract The aim of this work was to confirm the presence of Ehrlichia canis in blood samples of dogs from Concordia, Entre Ríos Province, Argentina. DNA was extracted in 14 blood samples of dogs with presumptive diagnosis of CME. A PCR protocol targeting dsb gene, specific for genus Ehrlichia was carried out for detection and species confirmation was carried out by sequencing. Twelve out of 14 samples shown bands of the expected size. The obtained sequences revealed 98-100% identity with E. canis sequences registered in GenBank. Moreover, ticks were retrieved from an E. canis positive dog and a fragment of mitochondrial ARNr 16S gene was amplified. The obtained sequences were identified as R. sanguineus sensu stricto (temperate linage). This work confirmed the presence of E. canis in Concordia city, Entre Ríos province resulting in an alert for veterinary clinicians in this region aiming to encourage prevention strategies of this disease and vector control.

Distribución anatómica de Rhipicephalus sanguineus sensu stricto (Acari: Ixodidae) sobre caninos domésticos / Anatomical distribution of Rhipicephalus sanguineus sensu stricto (Acari: Ixodidae) on dogs

Resumen En este trabajo se realizó el estudio de la distribución anatómica de los diferentes estadios de Rhipicephalus sanguineus sensu stricto sobre sus hospedadores principales, los caninos. El mismo se basó en muestreos mensuales durante tres años en la ciudad de Esperanza, Santa Fe, Argentina. Para determinar la distribución de los diferentes estadios parasitarios se dividió el cuerpo en regiones y se colectaron todos los especímenes en cada una de ellas. Las larvas tuvieron como preferencia las zonas de cabeza seguido de los espacios interdigitales, orejas y abdomen; las ninfas tuvieron preferencia por las orejas y abdomen, y otras zonas de preferencia fueron cabeza y espacios interdigitales; los adultos (machos y hembras) prefirieron localizarse en las orejas, cuello y lomo.

Abstract The anatomical distribution of the different stages of Rhipicephalus sanguineussensu stricto on canines was analyzed. Data was collected from dogs on monthly sampling during three years in the city of Esperanza, Santa Fe, Argentina. To determine the distribution of the different parasitic stages, the body surface was divided into regions and all specimens were counted in each of them. Larvae had preference for the head followed by the interdigital spaces, ears and abdomen, nymphs were mainly found on ears and abdomen, and other areas of preference were head and interdigital spaces; the adults (males and females) preferred the ears, neck and back.

Detection of tick-borne rickettsial pathogens in naturally infected dogs and dog-associated ticks in Medellin, Colombia / Detecção de patógenos rickettsiais transmitidos por carrapatos em cães naturalmente infectados e carrapatos associados a cães em Medellin, Colômbia

Abstract Tick-borne rickettsial pathogens (TBRP) are important causes of infections in both dogs and humans. Dogs play an important role as a biological host for several tick species and can serve as sentinels for rickettsial infections. Our aim was to determine the presence of TBRP in dogs and in dog-associated ticks and their potential risk to human diseases in Medellin, Colombia. DNA for E. canis (16S rRNA and dsb) and A. platys (groEl) was detected in 17.6% (53/300) and 2.6% (8/300) of dogs, respectively. Antibodies against Ehrlichia spp. 82 (27.3%) and Anaplasma spp. 8 (2.6%) were detected in dogs. Antibody reactivity against both agents were found in 16 dogs (5.3%). Eight dogs showed antibody for Rickettsia spp. with titers that suggest 3 of them had a probable exposure to R. parkeri. Rhipicephalus sanguineus s.l. (178/193) was the main tick in dogs, followed by R. microplus (15/193). The minimum infection rates (MIR) in R. sanguineus were 11.8% for E. canis and 3.4% for A. platys. E. canis and A. platys are the main TBRP infecting dogs and ticks and R. sanguineus s.l. is likely involved in the transmission of both agents. Interestingly, we found serological evidence of exposure in dogs for spotted fever group rickettsiae.

Resumo As riquétsias transmitidas por carrapatos (RTC) são causas importantes de infecção em cães e humanos. Os cães exercem um papel essencial como hospedeiros biológicos para diversas espécies de carrapatos, assim como podem ser úteis como sentinelas de infecções por riquétsias. O intuito deste estudo foi determinar a presença de RTC em cães, assim como em seus carrapatos, para determinar o risco potencial de doença humana em Medellín, Colômbia. DNA de Ehrlichia canis (16S rRNA e dsb) e Anaplasma platys (groEl) foi detectado em 17,6% (53/300) e 2,6% (8/300) dos cães, respectivamente. Anticorpos contra Ehrlichia spp. (82; 27,3%) e Anaplasma spp. (8; 2,6%) foram detectados nos cães. Reatividade de anticorpos contra ambos patógenos (Ehrlichia e Anaplasma) foi detectada em 16 cães (5,3%). Oito animais apresentaram anticorpos contra Rickettsia spp., e 3 deles sugerem uma provável exposição a Rickettsia parkeri. Rhipicephalus sanguineus s.l. (178/193) foi a principal espécie de carrapatos, seguida de R. microplus (15/193). A taxa de infecção mínima em R. sanguineus foi 11,8% para E. canis e 3,4% para A. platys. E. canis e A. platys são as principais RTC que infectam cãese R. sanguineus s.l. provavelmente está envolvido na transmissão de ambos os agentes. É evidente, porém, a exposição sorológica dos cães a riquétsias do grupo da febre maculosa.

Rickettsial pathogens circulating in urban districts of Rio de Janeiro, without report of human Brazilian Spotted Fever / Circulação de patógenos riquetsiais em bairros urbanos do Rio de Janeiro sem relatos humanos da Febre Maculosa Brasileira

Abstract Spotted fever group rickettsioses are emerging diseases. In some of these diseases, domestic dogs act as sentinels. Canine serological studies have demonstrated that rickettsial dispersion is concentrated in rural areas, seroprevalence being higher where human rickettsioses are endemic. In Rio de Janeiro, the Atlantic forest vegetation has been devastated by urbanization. In this context, we aimed to detect Rickettsia spp. in urban areas of the West Zone of Rio de Janeiro. Sera from 130 dogs were tested by Indirect Immunofluorescence Assay, and ticks collected from these dogs were tested by polymerase chain reaction. We found the rate of serological reactions against R. rickettsii and R. parkeri in our study area to exceed those of rural and non-endemic areas, highlighting the importance of dogs as urban sentinels. The possibility of contact with opossums and capybaras increased the chances of exposure to Rickettsia spp., reinforcing the hypothetical link between the landscape and the rickettsial wild cycle. Rhipicephalus sanguineus sensu lato was the tick most frequently observed. PCR-positive samples showed similarity with R. rickettsii and R. felis, an emerging pathogen rarely reported from ticks. We observed that rickettsiae circulate in urban places and ticks from indoor environments, which may be involved in bacterial epidemiology.

Resumo Riquetsioses do Grupo da Febre Maculosa são doenças emergentes. Em algumas destas doenças, os cães domésticos agem como sentinelas. Estudos sorológicos caninos têm demonstrado que a dispersão de patógenos rickettsiais está concentrada em áreas rurais, sendo a soroprevalência maior onde as rickettsioses humanas são endêmicas. Na cidade do Rio de Janeiro, a vegetação de Mata Atlântica vem sendo devastada pela urbanização. Nesse contexto, objetivou-se detectar a presença de Rickettsia spp. em áreas urbanas da Zona Oeste do Rio de Janeiro. Amostras de soro obtidas de 130 cães foram testadas, utilizando-se a Imunofluorescência Indireta. Carrapatos coletados desses cães foram testados, utilizando-se a reação em cadeia da polimerase. Observou-se que as taxas de reações sorológicas contra R. rickettsii e R. parkeri nessa área de estudo excederam a prevalência das áreas rurais e não endêmicas, destacando-se a importância dos cães como sentinelas urbanos das rickettsioses. A possibilidade de contato com capivaras e gambás favoreceu a exposição à Rickettsia spp., reforçando a hipótese de ligação entre a paisagem local e o ciclo silvestre de transmissão riquetsial. O carrapato Rhipicephalus sanguineus sensu lato foi encontrado com maior frequência. Amostras com positividade pela PCR mostraram similaridade com R. rickettsii e R. felis, um patógeno emergente raramente descrito em carrapatos. Observou-se circulação riquetsial em áreas urbanas e em carrapatos obtidos do ambiente doméstico, os quais podem estar envolvidos na epidemiologia dessas bactérias.

Primer reporte de un caso de ehrlichiosis monocítica canina en la provincia de Santa Fe, Argentina

La ehrlichiosis monocitica canina (EMC) es una enfermedad causada por la bacteria Ehrlichia canis, de distribución mundial, alta mortalidad en caninos doméstico y síntomas inespecíficos, lo que dificulta su diagnóstico clínico. Ehrlichia canis es transmitida por la garrapata Rhipicephalus sanguineus sensu lato a un hospedador, en Argentina se reconocen dos linajes (tropical y sensu stricto) de dicha especie. El objetivo del presente trabajo es reportar el primer caso confirmado de EMC por E. canis en un canino de la ciudad de Rafaela, Santa Fe, área endémica de R. sanguineus s.s. El 18/02/2019 llegó a la consulta privada un canino con síntomas inespecíficos como hipertermia tarde/noche, depresión, letargia, aplasia, inapetencia y pérdida de peso; más antecedente de parasitismo por garrapatas. La mascota presentaba anemia leve (4.730.000/mm³), enzimas hepáticas aumentadas (AST/ASA/GOT=72 U/l) y esplenomegalia. El test serológico in vitro y PCR para amplificar ADN E. canis fueron positivos, por lo que la mascota recibe tratamiento para EMC con doxiciclina 10 mg/kg/día durante 30 días, antiinflamatorios durante 5 días y protector hepático. A los 60 días de iniciado el tratamiento la mascota recuperó su peso normal y a los 120 días se realiza PCR como monitoreo de la eficacia del tratamiento dando resultado negativo.

Canine monocytic ehrlichiosis (CME) is a disease caused by Ehrlichia canis bacteria. It has a globally distributed and cause high mortality in domestic canines with nonspecific symptoms, which makes clinical diagnosis difficult. Eherlichia canis is transmitted to a host by the tick Rhipicephalus sanguineus sensu lato. In Argentina two lineages of this species are recognized (tropical and sensu stricto). The objective of this work is to report the first confirmed case of CME by E. canis in endemic area of R. sanguineus s.s from Rafaela, Santa Fe. On February 2, 2019 a canine arrived at the private clinic with non-specific symptoms such as late / night hyperthermia, depression, lethargy, aplasia, loss of appetite and weight loss, as well as, antecedent of tick parasitism. The pet had mild anemia (4,730,000/ m³), increased liver enzymes (AST/ASA/GOT = 72 U/l) and splenomegaly. The in vitro serological test and PCR to amplify E. canis DNA were positive, so the dog received treatment for CME with doxycycline 10 mg/kg/day for 30 days, anti-inflammatory for 5 days and liver protector. After 60 days of starting the treatment, the animal regained its normal weight and after 120 days the PCR have given negative result, checking the effectiveness of the treatment.

Especies de garrapatas (Acari: Ixodidae) parásitas de perros (Canis familiaris) en zonas urbanas del Gran Mendoza, Argentina

El conocimiento de las especies de ectoparásitos presentes en los animales de compañía tiene implicancias tanto en medicina veterinaria como en salud humana, ya que varios agentes tienen la potencialidad de transmitirse del animal al humano y viceversa. Se revisaron 466 garrapatas remitidas al Centro de Investigación en Parasitología Regional (CIPaR) durante los años 2010 y 2013, recolectadas en 217 perros de zonas urbanas de la provincia de Mendoza. El 83,5% (n=385) fueron identificadas como Rhipicephalus sanguineus sensu lato (84 machos y 199 hembras - relación 1:2,37 -, 65 ninfas y 37 larvas), mientras que el 16,5% (n=76) fue identificado como Amblyomma tigrinum (10 machos y 61 hembras - relación 1:6,1 -, y cinco ejemplares adultos en mal estado, imposibilitando su sexado). Adicionalmente, cinco ejemplares adultos sólo se identificaron como pertenecientes al género Amblyomma, ya que por encontrarse ingurgitados no se pudo realizar la determinación de especie. Éste registro es un importante aporte al conocimiento de las especies de garrapatas presentes en perros (Canis familiaris) en la provincia de Mendoza.

Knowledge of the ectoparasitic agents of pets has implications both in veterinary medicine and public health since several agents have the potential to spread from animal to human and vice versa. Ticks sent to the Centro de Investigación en Parasitología Regional (CIPaR) during 2010 to 2013 were analysed. 466 adult ticks were collected from 217 dog in urban areas from Mendoza province, Argentina. Of these, 83.5% (n=385) specimens were identified as Rhipicephalus sanguineus s.l. (84 male and 199 female - ratio 1:2.37 -, 65 nymphs and 37 larvae), while 16.5% (n = 76) were identified as Amblyomma tigrinum (10 males and 61 females - ratio 1:6.1 -, and five adults in bad condition, which precluded their sexing). In addition, five adult specimens, identified as Amblyomma, were not identified to the species level since they were fully engorged. This report is an important contribution to the knowledge of the species of ticks in dogs (Canis familiaris) in the province of Mendoza.

Detección de Borrelia burgdorferi sensu lato en perros y sus garrapatas en comunidades rurales de Yucatán, México / Detection of Borrelia burgdorferi sensu lato in dogs and its ticks in rural communities of Yucatán, Mexico

Resumen Actualmente, el estudio de la borreliosis canina adquiere mayor relevancia, ya que el perro es considerado como un importante centinela del complejo Borrelia burgdorferi sensu lato, el cual podría desempeñar un papel clave en la dispersión de garrapatas de las áreas selváticas al ambiente doméstico. En México, la distribución y presencia de genoespecies patógenas de B. burgdorferi en perros y sus garrapatas aún no ha sido investigada. Por tal motivo, la presente investigación tiene como objetivo detectar y estimar la prevalencia de B burgdorferi s.l. en perros y sus garrapatas en dos comunidades rurales de Yucatán, México. En cada comunidad se visitaron 50 viviendas donde se estudiaron 144 muestras de sangre de perros por punción de la vena safena, así como la colecta de sus garrapatas. Se colectaron un total de 846 garrapatas de las especies Ixodes affinis (33 / 846), Rhipicephalus sanguineus sensu lato (786 / 846) y Amblyomma mixtum (27 / 846). Para detectar la presencia de B. burgdorferi s.l. en dichas muestras, se amplificó el gen conservado flaB y las lipoproteínas de membrana externa, ospC y p66, mediante el uso de la reacción en cadena de la polimerasa. La prevalencia obtenida en sangre de perros fue de 17.3 % (25 / 144) para flaB, 12.50 % (18 / 144) para el gen p66 y 1.38 % (2 / 144) para el gen ospC. De las garrapatas analizadas, R. sanguineus s.l. tuvo una prevalencia de infección de 0.89 %, A. mixtum de 5.88 % e I. affinis de 15.15 %, siendo esta última especie la que presentó mayor prevalencia. Dos perros y sus garrapatas I. affinis fueron positivos al gen flaB. Solamente una garrapata R. sanguineus s.l. fue positiva al gen p66 y ninguna especie de garrapata fue positiva al gen ospC. Este estudio confirma la existencia de B. burgdorferi s.l. en perros y sus garrapatas en comunidades rurales de Yucatán, México. La detección de Borrelia en perros podría ser un criterio importante para la evaluación del riesgo de borreliosis en humanos, ya que el perro puede emplearse como indicador epidemiológico para la identificación de nuevos focos de esta enfermedad.

Abstract In Mexico, the distribution and the presence of pathogenic genospecies of B. burgdorferi in dogs and their ticks has not been extensively investigated. The study of canine borreliosis is acquiring greater relevance, since the dog is considered to be an important sentinel for pathogens pertaining to the complex Borrelia burgdorferi sensu lato; in addition, dogs could be playing a key role in the spread of ticks from forested areas into the domestic environment. This study aimed to detect and estimate the prevalence of B. burgdorferi s.l. in dogs and their ticks in two rural communities of Yucatán, Mexico. In each community, 50 houses were visited, where 144 blood samples from dogs were studied by puncture of the saphenous vein, as well as the collection of their ticks. To detect the presence of B. burgdorferi s.l. in these samples, the conserved gene flaB, p66 and ospC were PCR amplified. A total of 144 dog blood samples, and 846 of ticks were obtained from the examined animals. Considering tick species, Rhipicephalus sanguineus sensu lato (786 / 846) was common, while Ixodes affinis (33 / 846), and Amblyomma mixtum (27 / 846) resulted less frequent. As per gene conservation, the prevalence of B. burgdorferi in canine blood was 17.3 % (25 / 144) to flaB, 12.50 % (18 / 144) for p66 and 1.38 % (2 / 144) for the ospC gene. Within the analyzed ticks, R. sanguineus s.l. had a prevalence of 0.89 %, A. mixtum 5.88 % and I. affinis 15.15 %, being this last species the one that presented higher prevalence. Two dogs and their ticks I. affinis were positive to the flaB gene. Only a tick R. sanguineus s.l. was positive to the gene p66 and no tick species was positive the ospC gene. This study confirmed the existence of B. burgdorferi s.l. in dogs and their ticks in rural communities of Yucatán, Mexico. The detection of Borrelia in dogs may be an important criterion for the evaluation of the risk of borreliosis in humans, since the dog can be used as an epidemiological indicator for the identification of new outbreaks of this disease. Rev. Biol. Trop. 66(1): 428-437. Epub 2018 March 01.

Occurrence of ticks in dogs in a hospital population in the state of Espírito Santo, Brazil / Ocorrência de carrapatos em cães de população hospitalar no Espírito Santo

Ticks, along with fleas, are considered the main ectoparasites affecting dogs in Brazil. The literature is rich in reports on the occurrence of ticks, which are vectors of diseases in both dogs and humans. The study of the epidemiology of these arthropods provides important data that can help control the infestation in residential areas where dogs are present. Thus, the study of their occurrence in urban areas and veterinary services is very important. The aim of the present study was to determine the occurrence of ticks in dogs in a veterinary hospital population in the state of Espírito Santo, Brazil. Over a one-year period (July 2012 to July 2013), 1483 dogs brought to veterinary services in south-eastern Brazil were examined. Among the dogs examined, 8.97% presented tick infestation, of which 100% were identified as Rhipicephalus sanguineus sensu lato. Given that this species of tick acts as a vector for diseases, it is important that the official health services monitor the occurrence of infestation in dogs and humans, in order to identify diseases transmitted by these ticks in this region.(AU)

Os carrapatos, juntamente com as pulgas, são considerados, no Brasil, como os principais ectoparasitas do cão. A literatura é rica em relatos considerando a ocorrência de carrapatos, que são vetores de doenças para cães e humanos. O estudo da epidemiologia de artrópodes é um dado importante que pode ajudar a controlar a infestação em áreas domiciliadas com a presença de cães. Nesse sentido, o estudo de sua ocorrência em áreas urbanas e ou mesmo em serviços médicos veterinários é importante. O objetivo do presente estudo foi verificar a ocorrência de carrapatos em cães em uma população hospitalar do estado de Espírito Santo, Brasil. Durante um ano (julho de 2012 a julho de 2013), foram examinados 1483 cães atendidos em serviços hospitalares no sudeste do Brasil. Entre os cães examinados, 8,97% apresentaram infestação de carrapatos, sendo 100% deles identificados como Rhipicephalus sanguineus sensu lato. Uma vez que se trata de uma espécie de carrapato que atua como vetor de doenças, é importante que os serviços oficiais de saúde mantenham um monitoramento da ocorrência de infestação tanto em cães como em humanos, a fim de identificar doenças transmitidas por esses carrapatos nesta região.(AU)

Ehrlichia canis (Rickettsiales: Anaplasmataceae) en garrapatas Rhipicephalus sanguineus sensu lato del linaje templado (Acari: Ixodidae), provincia de Buenos Aires, Argentina

El objetivo del presente estudio es notificar el hallazgo de Ehrlichia canis en garrapatas Rhipicephalus sanguineus sensu lato (s. l.) del linaje templado (LTe) colectadas sobre un canino con ehrlichiosis monocítica canina de José C. Paz (zona noroeste del Área Metropolitana de Buenos Aires -AMBA-). Se colectaron 32 garrapatas, siendo determinadas taxonómicamente como R. sanguineus s. l. (30 larvas y 2 ninfas). Mediante una PCR inicial para la familia Anaplasmataceae para un fragmento del gen ARNr 16S, resultaron positivas un grupo de 10 larvas y una ninfa. Dichas muestras positivas también fueron amplificadas mediante una PCR para un fragmento del gen dsb del género Ehrlichia, y posteriormente secuenciadas, resultando en un 100% de identidad con E. canis. Los especímenes de R. sanguineus s.l. positivos para E. canis fueron estudiados mediante una PCR para del gen mitocondrial 16S de garrapatas del grupo Metastriata, demostrándose su pertenencia al linaje templado de R. sanguineus s. l. Los estudios experimentales y los antecedentes epidemiológicos relacionan E. canis con R. sanguineus s. l. del linaje tropical, pero considerando que el único linaje de R. sanguineus detectado en AMBA ha sido el LTe, es necesario continuar investigando para dilucidar el mecanismo de transmisión y la dinámica vectorial en esta área.

The aim of the present study was to report the presence of Ehrlichia canis in Rhipicephalus sanguineus sensu lato (s. l.) ticks of the temperate lineage (LTe) collected on a dog with canine monocytic ehrlichiosis from José C. Paz (northwest area of the Buenos Aires Metropolitan Area - BAMA-). Thirty-two ticks were collected (30 larvae and 2 nymphs). A group of 10 larvae and one nymph were positive to Ehrlichia in the initial PCR targeting a fragment of the Anaplasmataceae family 16S rRNA gene. These positive samples were also amplified by PCR for a fragment of the dsb gene of the genus Ehrlichia, and then sequenced, resulting in a 100% identity with E. canis. Specimens of R. sanguineus s.l. positive for E. canis were determined as belonging to the temperate lineage of R. sanguineus s. l. through the analysis of sequences from the tick mitochondrial 16S rRNA gene. Experimental studies and epidemiological background have related E. canis infection with R. sanguineus s. l. ticks of the tropical lineage, but the results of this study put in evidence the needed of new epidemiological studies on the vectorial competence of the different lineages of R. sanguineus s.l. to transmit E. canis.

Ixodidae fauna of domestic dogs in Parana, southern Brazil / Fauna ixodídica em cães domésticos no Paraná, Sul do Brasil

Abstract The present study aimed to contribute towards identification and registration of tick species that parasitize dogs in rural and urban areas of three mesoregions of Paraná, southern Brazil, and to estimate the rate of occurrence of each species. Fifty-six dogs with ticks living in three mesoregions: Metropolitana de Curitiba (MC), Centro Oriental (COP) and Centro Sul Paranaense (CSP), were used in the study. From these 56 dogs, 253 ticks were collected and were identified and morphologically characterized according to the species. Among all the ticks, 69.6% were identified as belonging to the species Rhipicephalus sanguineus sensu lato (s. l.); 28.1% as Amblyomma aureolatum and 2.4% as Amblyomma ovale. Among the dogs in MC that were evaluated, 57.7% were parasitized by R. sanguineus s. l., 38.5% by A. aureolatum and 3.8% by A. ovale; while in COP, 72.4% of the dogs were parasitized by A. aureolatum and 27.6% by R. sanguineus s. l.. In CSP, one tick was obtained, which was identified as A. aureolatum.

Resumo O presente estudo objetivou contribuir com a identificação e o registro das espécies de carrapatos que parasitam cães de áreas rurais e urbanas de três mesorregiões do Paraná, Sul do Brasil, e estimar a taxa de ocorrência de cada espécie. Cinquenta e seis cães com carrapatos, provenientes das mesorregiões: Metropolitana de Curitiba (MC), Centro Oriental (COP) e Centro Sul Paranaense (CSP) foram utilizados no estudo. Dos 56 cães, foram coletados 253 carrapatos que foram identificados e caracterizados morfologicamente de acordo com a espécie. Do total de carrapatos, 69,6% foram identificadas como pertencentes à espécie Rhipicephalus sanguineus s. l.; 28,1% como Amblyomma aureolatum e 2,4% como Amblyomma ovale. Dentre os animais avaliados, provenientes da MC, 57,7% estavam parasitados por R. sanguineus s. l., 38,5% por A. aureolatum e 3,8% por A. ovale; enquanto na COP 72,4% dos cães foram parasitados por A. aureolatum e 27,6% por R. sanguineus s. l.. Na CSP foi obtido um carrapato, identificado como A. aureolatum.

Ocorrência de carrapatos em Tamandua tetradactyla (Linnaeus, 1758) na Caatinga, Nordeste do Brasil / Occurrence of ticks in Tamandua tetradactyla (Linnaeus, 1758) in Caatinga biome, northeastern Brazil

A Caatinga é um bioma exclusivamente brasileiro e um dos mais diversificados do mundo, abrigando grande variedade faunística. Este estudo objetivou relatar a presença de carrapatos em tamanduás Tamandua tetradactyla (Linnaeus, 1758) atendidos no Centro de Conservação e Manejo de Fauna da Caatinga, Petrolina-PE, Brasil. De fevereiro de 2010 a fevereiro de 2016, 23 T. tetradactyla foram recebidos e inspecionados para avaliação da presença de carrapatos. A identificação foi realizada pela observação das características morfológicas e pela utilização de chaves taxonômicas. Aproximadamente 8,69% (2/23) dos animais apresentavam parasitismo por carrapatos. Os ixodídeos foram encontrados fixados nas regiões ventral e cervical, e identificados como Rhipicephalus sanguineus sensu lato (cinco fêmeas), Amblyomma auricularium (uma larva, 18 ninfas e uma fêmea) e Amblyomma sp. (seis larvas). Este estudo relata o parasitismo inédito de larva de A. auricularium em T. tetradactyla no semiárido pernambucano, bem como reafirma a maior afinidade por membros da superordem Xenarthra. O parasitismo de R. sanguineus s.l. em tamanduá-mirim pode estar relacionado ao compartilhamento do mesmo habitat com cães domésticos infestados. O parasitismo sobre animais silvestres em novas localidades onde não foi registrado previamente deve ser estudado para ampliação do conhecimento sobre a distribuição geográfica dos ixodídeos no Brasil.(AU)

The Caatinga is an exclusively Brazilian biome and one of the most diverse in the world, housing a great variety faunal. Southern Tamandua (Linnaeus, 1758), known as collared anteater, can be found throughout the country. The present study aimed to report the presence of ticks on anteaters treated at the Conservation Center and Wildlife Management of Caatinga, Petrolina, Pernambuco, Brazil. From February 2010 to February 2016, 23 T. tetradactyla from the municipalities of Juazeiro (BA) Casa Nova (BA), Sento Sé (BA), Nonato (PI), Petrolina (PE), Great Pond (PE ) and Willow (PE), have been received and inspected to evaluate the presence of ticks, which were later collected with the help of anatomical tweezer and stored in tubes containing 70% alcohol. The identification was carried out by observation of morphological characteristics in stereomicroscope and use of taxonomic keys. Approximately 8.69% (2/23) of the animals had parasitism by ticks. The Ixodids were found fixed on ventral and cervical regions and were identified as Rhipicephalus sanguineus sensu lato (five female), parasitizing the anteater 1 coming from Petrolina-PE; Amblyomma auricularium (one larva, 18 nymphs and a female) and Amblyomma sp. parasitizing the anteater 2 coming from Salgueiro-PE. This study reports the novel parasitism by larva of A. auricularium in T. tetradactyla in semiarid of Pernambuco ; and reaffirms the higher affinity of this ixodid by members of the superorder Xenarthra. It was possible to determine the parasitism of R. sanguineus s.l. in collared anteater, the which may be related to the sharing of the same habitat with domestic dogs infested. The parasitism of wild animals in new locations where they were not previously registered must be stimulated to expand the knowledge of the geographical distribution of ixodids in Brazil.(AU)

Using plastic tips in artificial feeding of Rhipicephalus sanguineus sensu lato (Acari: Ixodidae) females / Uso de ponteiras plásticas na alimentação artificial de fêmeas de Rhipicephalus sanguineus

Abstract This study evaluated the influence of the initial weight, feeding period and temperature on weight gain and biological parameters of the non-parasitic phase of partially engorged Rhipicephalus sanguineus females that were artificially fed using plastic tips as feeding devices. The device did not alter the oviposition of the females or any other parameters evaluated. Furthermore, it was observed that the temperature of the feeding the group did not affect the weight gain and biology of ticks. This device has great potential for the development of studies on bioagent transmission because it provides higher intake of blood by ixodid ticks.

Resumo Este estudo avaliou a influência do peso inicial, período de alimentação e temperatura no ganho de peso e parâmetros biológicos da fase não parasitária, de fêmeas parcialmente ingurgitadas de Rhipicephalus sanguineus alimentadas artificialmente utilizando ponteiras plásticas como dispositivo de alimentação. O dispositivo não alterou a oviposição das fêmeas ou quaisquer outros parâmetros avaliados. Além disso, observou-se que a temperatura de alimentação do grupo não afetou o ganho de peso e a biologia dos carrapatos. Este dispositivo tem um grande potencial para o desenvolvimento de estudos sobre a transmissão de bioagentes, uma vez que proporciona maior ingestão de sangue por carrapatos ixodídeos.

Immunogenic potential of Rhipicephalus (Boophilus) microplus aquaporin 1 against Rhipicephalus sanguineus in domestic dogs / Potencial imunogênico da aquaporina 1 de Rhipicephalus (Boophilus) microplus contra o carrapato Rhipicephalus sanguineus em cães domésticos

Abstract This study evaluated a recombinant aquaporin 1 protein of Rhipicephalus (Boophilus) microplus (RmAQP1) as antigen in a vaccine against R. sanguineus. Five dogs were immunized with RmAQP1 (10 µg) + adjuvant (Montanide) (G1), and five were inoculated with adjuvant only (G2), three times. Twenty-one days after the last immunization, animals of both groups were challenged with R. sanguineus larvae, nymphs and adults, and their biotic potential was compared. Blood samples were collected before each immunization and every 28 days after the last immunization for 10 weeks. Serum antibody titers (IgG) were assessed by ELISA. We observed that: engorgement period of adult females from G1 was 12% shorter than G2; larvae from G1 had 8.7% longer engorgement period than G2 and weighed 7.2% less; nymphs from G1 had 4.5% shorter engorgement period than G2 and weighed 3.6% less; although the antibody titers increased following the second immunization, they rapidly decreased after the third immunization. Results indicated low immunoprotection of RmAQP1 against adult R. sanguineus ticks, and possible efficacy on larvae and nymphs fed on immunized dogs. Further studies should be performed for a full evaluation of the immunoprotection of RmAQP1 against R. sanguineus infestations in dogs.

Resumo Este estudo avaliou a proteína recombinante (aquaporina) do carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus como antígeno em vacina contra Rhipicephalus sanguineus. Cinco cães foram imunizados com RmAQP1 (10 µg) + adjuvante (G1) e cinco foram inoculados apenas com adjuvante (G2), três vezes. 21 dias após a última imunização todos os animais foram desafiados com larvas, ninfas e adultos de R. sanguineus, e potencial biótico dos carrapatos foi comparado. Amostras de sangue foram coletadas antes de cada imunização e a cada 28 dias após a última imunização, durante 10 semanas. Títulos de anticorpos dos soros dos cães foram avaliados por ELISA. Resultados: o período de ingurgitamento das fêmeas do G1 foi 12% mais curto que o período de ingurgitamento de G2; o período de ingurgitamento das larvas do G1 8,7% foi mais longo e o peso 7,2% menor que no caso de G2; o período de ingurgitamento das ninfas do G1 4,5% foi mais curto e peso 3,6% menor que no caso do G2; aumento dos títulos de anticorpos do G1 após a segunda imunização e declínio após a terceira imunização. Os resultados indicaram baixo potencial de imunoproteção de RmAQP1 contra R. sanguineus adultos, e possível eficácia contra larvas e ninfas, na dose testada. Sugere-se desenvolver novos estudos para melhor avaliação da eficácia de RmAQP1 contra R. sanguineus em cães.

Human parasitism by Rhipicephalus sanguineus sensu lato (Acari: Ixodidae) in Mato Grosso do Sul, West-Central Brazil / Parasitismo humano por Rhipicephalus sanguineus sensu lato (Acari: Ixodidae) no Mato Grosso do Sul, Centro-Oeste do Brasil

Human parasitism by the brown dog tick Rhipicephalus sanguineus sensu lato (s. l.), an important parasite in medical and veterinary sciences, is only rarely reported in the American continent. The present investigation reports a R. sanguineus s. l. male tick parasitizing a human in the city of Campo Grande, State of Mato Grosso do Sul, west-central Brazil. This observation is of public health relevance, since R. sanguineus s. l. ticks are known as vectors of spotted fever group rickettsiae to dogs and humans.(AU)

O parasitismo humano pelo carrapato marrom do cão, Rhipicephalus sanguineus sensu lato (s. l.), um importante parasita para a saúde pública e veterinária, é raramente relatado no continente americano. Este trabalho relata o registro de um macho de R. sanguineus s. l. parasitando um humano na cidade de Campo Grande, estado do Mato Grosso do Sul, no Centro-Oeste do Brasil. Essa observação é relevante para a saúde pública, uma vez que os carrapatos desse complexo são conhecidos como vetores de riquétsias do grupo da febre maculosa para cães e humanos.(AU)

Preliminary investigation on infection of novel bunyavirus among animals and ticks in Shanghai, from 2012 to 2014 / 中国人兽共患病学报

To investigate the distribution of ticks and to detect the new bunyavirus in ticks and infection rate in animals in Shanghai,outdoor free ticks were captured by flag method and ticks on animals were collected by animal capture.SFTSV in ticks were detected by real-time RT-PCR.Total antibodies against SFTSV in host animal sera were tested by double antigen sandwich method.Results showed that during 2012-2014,free ticks were captured in Chenshan Park and Jinshan Island,which were all Haemaphysalis longicornis.Ten of seventeen districts found ticks on animals which were dominantly Rhipicephalus sanguineus.No nucleic acid of SFTSV was detected in 143 ticks.Main host animal for ticks was dog,sheep was in the second.Sera in 198 dogs from 6 urban districts,120 swine from Pudong and Fenxian districts and 36 sheep from Chongming District were all SFTSV antibody negative.Ticks were not found with SFTSV in Shanghai during 2012-2014.No SFTSV infection was found in host animals.Therefore,there is no evidence that Shanghai is the natural foci of SFTSV.Further surveillance and investigations should be carried out in the future.

Babesia canis vogeli infection in dogs and ticks in the semiarid region of Pernambuco, Brazil / Infecção por Babesia canis vogeli em cães e carrapatos de uma região semiárida de Pernambuco

This study aimed to report the prevalence of Babesia canis vogeli in dogs and ticks in the urban and rural areas of Petrolina, Pernambuco. Serum and peripheral blood samples of 404 dogs were tested by indirect immunofluorescence assay (IFA) and by blood smears, respectively. The presence of tick infestation was evaluated, and some specimens were submitted to DNA amplification by polymerase chain reaction (PCR). The presence of antibodies anti-B. canis vogeli was determinate in 57.9% (234/404) of dogs. The direct detection of Babesia spp was obtained in 0.5% (2/404) dogs by visualization of intraerythrocytic forms. Infestation by Rhipicephalus sanguineus sensu lato was observed in 54.5% (220/404) of dogs in both urban and rural areas. DNA of Babesia canis vogeli were obtained by PCR in 6% individual (3/50) and 8.7% of pool of ticks (7/80). The risk factors for the presence of anti-B. canis vogeli antibodies, as determined through the application of logistic regression models (P<0.05), were the following: medium breed size variables (P<0.001); contact with areas of forest (P=0.021); and access on the street (P=0.046). This study describes, for the first time, the confirmation of infection of B. canis vogeli in dogs and ticks in the semiarid region of Pernambuco, Brazil.

Este trabalho objetivou avaliar a prevalência de Babesia canis vogeli em cães e carrapatos de áreas urbanas e rurais do município de Petrolina, Pernambuco, Nordeste do Brasil. Amostras de soro e sangue periférico de 404 cães foram testadas pela Reação de Imunoflorescência Indireta (RIFI), e por esfregaço sanguíneo. A presença de infestação por carrapatos foi avaliada, e alguns espécimes foram submetidos à amplificação do DNA pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR). A presença de anticorpos anti-B. canis vogeli foi determinada em 57,9% (234/404) dos cães. A soroprevalência em áreas urbanas e rurais foi 48,5% e 67,3%, respectivamente. A detecção direta de Babesia spp foi obtida em 0,5% dos cães pela visualização de formas intraeritrocitárias. A infestação pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus foi observada em 54,5% (220/404) dos cães. DNA de Babesia canis vogeli obtido pela PCR foi 6% (3/50) em carrapatos processados individualmente e 8,7% (7/80) em pools. Os fatores de risco para presença de anticorpos anti- B. canis vogeli utilizando modelo de regressão logística (P < 0,05) foram porte médio (P <0,001), contato com áreas de floresta (P = 0,021), e acesso dos cães à rua (P = 0,046). Este estudo descreve pela primeira vez a confirmação da infecção de Babesia canis infectando cães e carrapatos em uma região semiárida de Pernambuco, Brasil.

Detección molecular de Rickettsia massiliae y Anaplasma platys en garrapatas Rhipicephalus sanguineus y caninos domésticos del municipio de Bahía Blanca (Argentina) / Molecular detection of Rickettsia massiliae and Anaplasma platys infecting Rhipicephalus sanguineus ticks and dogs, Bahía Blanca (Argentina)

Background: Rickettsioses, ehrlichioses and anaplasmoses are caused by Gram negative obligate intracellular bacteria and transmitted mainly by arthropods. Aim: To detect and perform the molecular characterization of these pathogens in ticks and domestic dogs in Bahia Blanca City (Buenos Aires, Argentina). Methods: Fifty six blood samples from dogs and 82 ticks (75 Rhipicephalus sanguineus and 7 Amblyomma tigrinum) were studied. The samples were analyzed by PCR for Rickettsia (intergenic space 23S-5S rRNA), Ehrlichia/Anaplasma (16S rRNA), and Anaplasma platys (16S rRNA). Results: 12% of R. sanguineus resulted positive for Rickettsia, identified by sequencing as Rickettsia massiliae; and 37.5% of the canine blood samples analyzed were positive for A. platys. Molecular characterization was also performed by amplification of the fragment of the citrate synthase gene (gltA) (Rickettsia genus) and the groESL gene (A. platys). Phylogenetic trees were constructed using the neighbor-joining method. These trees revealed that sequences obtained are similar to those from other geographical regions. Conclusion: The results indicate the presence of R. massiliae in R. sanguineus ticks for the second time in an urban area of South America and A. platys infection in dogs, being the southernmost region of Argentina where it has been notified.

Introducción: Las rickettsiosis, ehrlichiosis y anaplasmosis son causadas por bacterias gramnegativas, intracelulares obligadas y transmitidas principalmente por artrópodos. Objetivo: Detectar y caracterizar molecularmente estos patógenos en garrapatas y caninos domésticos del municipio de Bahía Blanca (provincia de Buenos Aires, Argentina). Material y Métodos: Se estudiaron 56 muestras sanguíneas de caninos, 75 garrapatas Rhipicephalus sanguineus y 7 Amblyomma tigrinum. Las muestras fueron analizadas por RPC para Rickettsia (espacio intergénico 23S-5S ARNr), Ehrlichia y Anaplasma (16S ARNr), y Anaplasma platys (16S ARNr). Resultados: Se detectó positividad a Rickettsia en 12% de R. sanguineus, identificándose por secuenciación a Rickettsia massiliae. Las muestras sanguíneas de los caninos resultaron en 37,5% positivas a A. platys. También se caracterizaron molecularmente por la amplificación del fragmento del gen citrato sintasa (gltA) (género Rickettsia) y del gen groESL (A. platys). Se construyeron árboles filogenéticos utilizando el método del vecino más cercano (neighbor-joining) revelando que las secuencias obtenidas son similares a las de otras regiones geográficas. Conclusión: Los resultados indican la presencia de R. massiliae en garrapatas R. sanguineus en una segunda zona urbana de Sudamérica y la infección por A. platys en caninos, siendo la región más austral de Argentina donde ha sido notificada.

Participation o ticks in the infectious cycle f canine visceral leishmaniasiss, in teresina, piauí,BBrazil / Participação do Rhipicephalus sanguineus no ciclo infeccioso da leishmaniose visceral canina em Teresina, Piauí, Brasil

In this study, we detected Leishmania spp. infection in R. sanguineus collected from dogs that were naturally infected with L. (L.) infantum. We examined 35 dogs of both sexes and unknown ages. The infected dogs were serologically positive by the immunofluorescence antibody test (IFAT), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and Quick Test-DPP (Dual Path Platform), as well as parasitological examination of a positive skin biopsy or sternal bone marrow aspiration. Ten negative dogs were included as controls. The ticks that infested these dogs were collected in pools of 10 adult females per animal. The PCR was performed with specific primers for Leishmania spp., which amplified a 720-bp fragment. Of the 35 analyzed samples, a product was observed in eight samples (8/35; 22.9%). We conclude that the presence of parasite DNA suggests that ticks participate in the zoonotic cycle of canine visceral leishmaniasis, in the city of Teresina, Piauí.

Neste estudo foi detectada infecção por Leishmania spp. em Rhipicephalus sanguineus (R. sanguineus) de cães naturalmente infectados por Leishmania (Leishmania) infantum = L. (L.) infantum. Foram utilizados 35 cães de ambos os sexos e idades desconhecidas, sorologicamente positivos pelas técnicas de reação de imunofluorescência indireta (RIFI), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) e Quick Test-DPP (Dual Path Plataform), e com exame parasitológico positivo em biópsia de pele ou punção de medula óssea esternal e 10 cães domiciliados negativos, como controle. Os carrapatos que infestavam esses cães foram coletados em pool de 10 fêmeas adultas por animal. A Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR = Polymerase Chain Reaction) foi realizada com primers para Leishmania spp., que amplificaram 720pb. O resultado das 35 amostras processadas revelou a amplificação de oito amostras (8/35 - 22,9%). Conclui-se que a presença do DNA do parasita sugere que carrapatos podem estar participando do ciclo zoonótico da leishmaniose visceral canina na cidade de Teresina, Piauí.

Rhipicephalus sanguineus sensu lato (Ixodidae) in synantropic rodents in Rio Grande do Sul, Brazil / Rhipicephalus sanguineus sensu lato (Ixodidae) em roedores sinantrópicos no Rio Grande do Sul, Brasil

Rhipicephalus sanguineus, the brown dog tick, is responsible for maintaining and transmitting various pathogens, both in animals and human beings, and it is of great sanitary importance. This communication reports the first occurrence of Rhipicephalus sanguineus sensu lato parasitizing Rattus norvegicus in the state of Rio Grande do Sul, Brazil, and it is also the first record of this tick species parasitizing Rattus rattus in Brazil. The rodents were captured from the port area, located in the city of Pelotas, Rio Grande do Sul, Brazil. We collected 6 larvae of this tick species from 2 male R. rattus individuals, and 3 larvae from 2 female R. norvegicus individuals; parasitized specimens of both rodent species were captured from different sites within the experimental area. This record broadens the number of Rhipicephalus sanguineus sensu lato hosts in urban areas, indicating the need for continued monitoring on population density for both R. sanguineus and synanthropic rodents.

Rhipicephalus sanguineus, carrapato-vermelho-do-cão, é responsável por manter e transmitir diversos patógenos tanto para animais quanto para o homem, sendo de grande importância sanitária. Essa comunicação relata a primeira ocorrência de Rhipicephalus sanguineus sensu lato parasitando Rattus norvegicus no Estado do Rio Grande do Sul e, pela primeira vez, Rattus rattus no Brasil. Os roedores foram capturados na área portuária da cidade de Pelotas, Rio Grande do Sul, Brasil. Foram coletadas seis larvas desse carrapato em dois machos de R. rattus e três larvas em duas fêmeas de R. norvegicus. As duas espécies de roedores parasitados foram capturadas em pontos distintos na área do experimento. Esse registro amplia o número de hospedeiros de Rhipicephalus sanguineus sensu lato em áreas urbanas, indicando a necessidade de monitoramento contínuo da densidade populacional, tanto de R. sanguineus quanto de roedores sinantrópicos.